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伟德开户平台母种的分离和培养技术
作者:    来源:本站整理    点击数:   文章发布时间:2009年02月11日 【字体:

  母种培养基的配制

  1. 母种培养基的种类

  母种是伟德ios版官方下载生产的关键,要求纯度高,不能混生杂菌,同时母种的菌丝体较为纤细,分解培养料的能力较弱。因此,母种菌丝体需要培养在营养丰富,易被吸收,表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多,常用的有下列几种:

  ① 马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基: 马铃薯(去皮) 200克 琼脂 20克 葡萄糖(或蔗糖) 20克 水 1000毫升
  ② 麦芽汁—葡萄糖—琼脂培养基: 干麦芽 250克 琼脂 15~20克 葡萄糖(或蔗糖) 10克 水 1000毫升
  ③ 胡萝卜—葡萄糖—琼脂培养基: 胡萝卜 100克 琼脂 20克 葡萄糖(或蔗糖) 20克 水 1000毫升
  ④ 蘑菇汁—葡萄糖一琼脂培养基(适用于蘑菇): 鲜蘑菇 250克 琼脂 20克 葡萄糖(或蔗糖) 20克 水 1000毫升
  ⑤ 蛋白胨—葡萄糖—琼脂培养基: 蛋白胨 2克 葡萄糖 20克 磷酸氢二钾 2克 维生素B1(硫胺素) 0.5毫克 磷酸二氢钾 0.5克 琼脂 18克 硫酸镁 0.5克 水 l000毫升

  2. 母种培养基的制法

  以最常用的马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基的制法为例介绍如下:先将马铃薯去皮,洗涤,切成小块加水1000毫升,煮沸15~20分钟,取双层纱布过滤,取其滤液,加入琼脂和葡萄糖(或蔗糖),用文火加热使其溶化,最后补足水分,使其容量仍为1000毫升。趁热分装于试管中,装量约为试管长度的1/5左右,装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。试管口塞上大小合适的棉花塞,塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。塞好棉塞后,每10支作一捆,用牛皮纸包扎好后,置铁丝网笼中,然后进行高压灭菌。如作为孢子分离用,则将培养基分装于三角瓶或培养皿中,然后高压灭菌。

  3. 母种培养基的消毒灭菌

  母种培养基通常用高压蒸汽灭菌锅来消毒灭菌,常用的高压蒸汽灭菌锅有直式、卧式和手提式三种。将配制好后的母种培养基移入上述任何一种高压蒸汽灭菌锅中,在15公斤/平方厘米 压力下,消毒灭菌30分钟。
高压蒸汽灭菌主要是依靠提高蒸汽的温度来灭菌的,因此灭菌时,应将锅内的冷空气全部排除。否则,尽管压力表上的压力已达到要求,然而,灭菌锅内的温度却未达到所需的温度(表11)。排除冷空气的方法是加热后当压力表上指针上升到0.5公斤/平方厘米时,打开排气阀,放气至指针仍回到“零”的位置。灭菌的时间是以排除冷空气后,压力回升到1.5公斤/平方厘米 时才开始计算。每次灭菌之后,要等压力降到“零”时,才打开锅盖,否则,灭菌的液体会因突然减压而外溢,玻璃器皿也会因突然降温而破裂。
  
下表高压灭菌时压力的换算及其与温度的关系 :
磅/平方英寸     公斤/平方厘米        灭菌器中的温度(℃)
                                   排除空气    未排除空气
    5            0.352              108.4        72
   10            0.703              115.2        90
   15            1.055              121.0       100
   20            1.406              126.0       109
   25            1.758              130.4       115
   30            2.109              134.5       121
  在没有高压蒸汽灭菌锅设备的情况下,可用蒸锅、蒸笼等进行常压灭菌。由于密封性差,压力升不高,温度只能升至102℃左右因此要连续蒸4~6小时才能达到灭菌的目的。
 
  高压严菌后将试管取出排成斜面备用。

  母种分离材料的选择

  1. 子实体的选择

  无论是用作孢子分离或组织分离的子实体,都要从产量高,长势好,适应性强,无杂菌虫害的群体中,选择朵大,生长健壮的单生子实体作为分离的材料。
 
  选作分离的子实体,成熟度要适当,如蘑菇、草菇具有菌膜,最好选菌膜将破而未破的成熟度,这种子实体发育已成熟,子实层又未受污染,因此能很快散出大量的无菌孢子。对没有菌膜或菌膜自幼已破的伟德开户平台,如香菇、平菇等,则以选取八分熟,正在释放孢子的个体为最好;因为刚从担子弹射出来的孢子基本上也是无菌的。

  2. 菇木和耳本的选择

  木生伟德开户平台如香菇、银耳、黑木耳等,可以从它们生长的基质,即菇木和耳木作为分离的材料。选择时,应从野生或人工栽培场所挑选子实体生长健壮,朵大,长势好,菌丝在段木中发育旺盛,材质较为结实,尚未腐烂,一般是接种后一年内已出菇、出耳而无杂菌害虫感染的幼龄菇木或耳木为最好。采去子实体后,截取适当部位,挂于通风处风干后,供分离时用。

  母种的分离方法

  1. 孢子分离法

  是利用伟德开户平台的有性孢子或无性孢子,萌发成菌丝,获得细菌种的一种方法。按分离时挑取孢子的数目不同,又分为单孢子分离法和多孢子分离法两种。蘑菇、草菇等由于孢子没有性的区别,采用单孢子分离获得纯伟德ios版官方下载,有结实能力,而其它伟德开户平台如香菇、银耳、黑木耳等由于孢子有性别之分,单孢子分离得到的菌丝不能结实,所以,只在育种上采用,生产上很少采用多孢子分离法,是把许多孢子接种于同一培养基上,让它们萌发,自然交配而获得纯种,操作简单易学,生产上经常采用。由于采集孢子的方法不同又分为如下几种:

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  常用计量单位符号 1、时间:d(天)、h(小时)、min(分)、s(秒)。 2、长度:km(千米)、m(米)、cm(厘米)、mm(毫米)。 3、面积:m2(平方米)、667m2(亩)、hm2(公顷)。 4、体积:m3(立方米)、L(升)、ml(毫升)、μl(微升)。 5、质量:t(吨)、kg(公斤 千克)、g(克)、mg(毫克)、μg(微克)。 6、浓度:mg/L、mg/kg(ppm,1×10-6)。

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